Les Tests en détails

Comment dépister le VIH chez un individu à partir du test Elisa ?

Des protéines virales ont été préalablement fixées par effet électromagnétique sur une plaque alvéolée ou dans le fond de petites cupules.

Etape 1 : On remplit la plaque alvéolée (ou les cupules) avec le sérum du patient à tester.

Tous les schémas représentent le cas d'une personne contaminée par le virus du VIH.

Si le patient est contaminé par le virus du SIDA, son sang contiendra des anticorps anti-VIH qui se seront formés pour combattre l’infection. Ces anticorps vont reconnaître les protéines virales fixées sur la plaque alvéolée et ainsi se lier à celles-ci.

Si le patient n’est pas contaminé par le virus du SIDA, son sang ne contiendra pas d’anticorps anti-VIH et rien ne va se lier aux protéines virales.

  • Laissez incuber 15 minutes, puis rincer quatre fois au PBS TWEEN.

Etape 2 : On ajoute ensuite une solution contenant des anti-anticorps du VIH auxquels sont fixées des enzymes.

Dans le cas d’une contamination, ces anti-anticorps et leurs enzymes vont se lier aux anticorps anti-VIH déjà accrochés dans l’étape précédente.

Dans le cas d’un patient sain, les anti-anticorps ne vont pas se lier car ils ne reconnaîtront pas les anticorps spécifiques aux VIH qui étaient censés se fixer à la première étape lors d’une contamination.

  • Laissez incuber 15 minutes, puis rincer quatre fois au PBS TWEEN.

Etape 3 : On ajoute ensuite le révélateur incolore de l’enzyme reliée aux anti-anticorps.  

Si le patient est atteint du virus du Sida et suite aux différentes étapes, l’enzyme reliée aux anti-anticorps se trouve dans le fond de la plaque alvéolée ou dans les cupules. L’enzyme au contact du révélateur se colore et la solution se teinte. Si la solution prend une teinte colorée c’est que le patient possède des anticorps anti-VIH c’est-à-dire qu’il est contaminé par le Sida mais que la maladie ne s’est pas encore déclarée.

Si le patient n’est pas atteint du virus du Sida, l’enzyme reliée aux anti-anticorps est partie au second rinçage. Le révélateur ne va donc rien mettre en évidence et la solution ne va pas se colorer.

Comment dépister le virus du Sida grâce au test Western Blot ?

Dans les centres de diagnostics, il existe des bandelettes tests dites «  toutes prêtes ». Sur ces bandelettes sont déposées différentes protéines séparées en fonction de leur masse moléculaire, issues du virus VIH. Le test du Western Blot se déroule en huit étapes : ( Les schémas représentent le cas d’un patient atteint par le virus du sida ).

  • Etape 1 : Suite à une prise de sang, on prend le sérum1 du patient contenant trois protéines différentes du VIH. On dépose le sérum sur une bande d’électrophorèse. 


  • Etape 2 : On applique à ces protéines un courant électrique qui va les faire migrer selon leur masse moléculaire et leur charge électrique. Il s’agit du principe de l'électrophorèse2 .

 

          

  • Etape 3 : Les trois protéines maintenant séparées sont transférées sur un buvard de nitrocelullose3.

  • Etape 4 : On dépose ensuite des anticorps anti-VIH qui sont produits en laboratoire, car le patient n’en a pas ou pas encore. On évite ainsi le problème de la fenêtre sérologique connu avec le test Elisa. 

  • Etape 5 : On procède à un premier rinçage où seuls subsistent les anticorps ayant fixé une protéine virale.

 

  • Etape 6 : On dépose des anticorps dirigés contre les anticorps anti-VIH. Ces anticorps sont également produits en laboratoire. Ils portent une enzyme.

  •  Etape 7 : On réalise de nouveau un rinçage où les anticorps n’ayant pas fixés les anticorps anti-VIH sont éliminés. Ainsi les anticorps portant une enzyme sont éliminés pour un patient non contaminé, car son sang ne contient pas de protéines virales.Les anticorps anti-VIH ont tous été emportés par le rinçage, les seconds anticorps ne sont donc pas fixés.
  • Etape 8 : On ajoute ensuite un révélateur de l’enzyme contenue dans les seconds anticorps.

Si le patient est contaminé et que son sérum contient ces protéines virales du virus du VIH, alors l’enzyme transforme le substrat par un produit coloré. C’est ainsi que s’explique l’apparition de bandes colorées sur le buvard de nitrocellulose.

Si le patient n’est pas contaminé, de telles protéines ne sont pas présentes, donc aucun anticorps ne reste. Si le patient n’est pas contaminé, il n’apparaît aucune bande colorée sur le buvard de nitrocellulose.

 

Définition :

1 Sérum : Le sérum est le liquide sanguin débarrassé de ses cellules et des protéines de la coagulation.

2 Electrophorése : Technique de laboratoire permettant la séparation des protéines ou des acides nucléiques grâce à leur différence de masse en présence d'un champ électrique.

3 Buvard de nitrocellulose : Nitrate de cellulose. La nitrocellulose est utilisée notamment dans la fabrication des explosifs, du celluloïd.


Tout les schémas on été réalisé par nos soins.